产品货号:
GS0248
中文名称:
原位细胞凋亡检测试剂盒(FITC)
英文名称:
In Situ Cell Apoptosis Detection Kit,FITC
产品规格:
20T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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细胞凋亡在许多生理过程中是至关重要的。目前已经描述了几种鉴定凋亡细胞的方法。核内解离被认为是凋亡的关键生化事件,导致双链,低分子量DNA片段以及高分子量DNA中的单链断裂。可以通过在酶反应中用修饰的核苷酸标记游离的3'-OH末端来鉴定那些DNA链断裂。末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)可以催化DIG-dUTP释放3'-OH DNA末端。DIG-dUTP首先与生物素缀合的抗地高辛抗体反应,后者与链霉抗生物素蛋白-F1C(SABC-FITC)结合。FITC在约490~495nm处被激发,并在520~530nm处发出可见的黄绿色光。
组分 | 规格 |
组分A:Labeling Buffer | 1mL |
组分B:TdT(20×) | 20μL |
组分C:DIG-dUTP (20×) | 20μL |
组分D:Blocking Reagent | 4mL |
组分E:生物素标记digoxin抗体 | 20μL |
组分F:SABC-FITC(100×) | 20μL |
组分G:Protein K(200×) | 50μL |
组分H:抗体稀释液 | 4mL |
阳性对照样品 | 2样 |
保存:-20℃,有效期1年。
- 在染色过程中,避免组织干燥。
- 使用前,请将试剂盒所有组份离心。
- 样品制备:
- 对于细胞涂片:在室温下用4%多聚甲醛固定30~60分钟,并用PBS冲洗两次,每次2~5分钟。
- 对于冷冻切片:在室温下用4%多聚甲醛固定30~60分钟,并用PBS冲洗两次,每次2~5分钟。
- 对于石蜡切片:根据常规方案进行脱蜡处理,并用PBS冲洗两次,每次2分钟。
- 对于细胞涂片:在室温下用4%多聚甲醛固定30~60分钟,并用PBS冲洗两次,每次2~5分钟。
- 用0.01M TBS将Protein K 200×(组分G)稀释成1×工作液。(0.01M TBS的制备:加入8.5g NaCl,1.2g Tris和0.45~0.5mL乙酸至1L双蒸水中,溶解,混匀。)
- 加入20~100μL Protein K工作液至样品中(仅限石蜡切片,细胞和冷冻切片不需要蛋白K消化),并在37℃下消化5~15分钟。然后用0.01M TBS冲洗3次,每次2分钟。
注:最佳的消化时间应根据细胞类型,实验目的等因素决定。 - 反应混合物的制备:加入1μL TdT (组分B) and 1μL DIG-dUTP (组分C)至18μL Labeling Buffer (组分A)中,混匀。
- 将反应混合物加入到样品中,20μL/样以保持样品湿润,置于湿盒中,37℃,标记孵育2小时。
- 用0.01M的TBS洗涤三次,每次2分钟。
- 加入50 Blocking Reagent (组分D),室温孵育30分钟,丢弃阻断试剂,在此步骤无需洗涤样品。
- 用抗体稀释液(组分H)按照1:100的比例稀释生物素标记digoxin抗体(组分E),混匀,加入50μL至样品中。
- 置于湿盒中,37℃,反应30分钟。
- 用0.01M TBS洗涤3次,每次两分钟。
- 用抗体稀释液(组分H)按照1:100的比例稀释SABC-FITC (组分F),混匀,加入50μL至样品中。
- 置于湿盒中,37℃,反应30分钟。
- 用0.01M TBS洗涤3次,每次五分钟。
- 后续可用DAPI染色液轻度复染,水洗,封片后观察,细胞核中有黄绿色颗粒的为阳性细胞。
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